人参皂苷Rg1对氧糖剥夺/复氧所致神经元损伤后突触可塑性的影响及机制探讨
目的： 本论文以治疗缺血性脑卒中中成药的临床使用规律为切入点，以中医活血化瘀的治法及中药三七是对应的高频使用中药为依据，选择三七中主要有效成分人参皂苷Rg1为对象，以人参皂苷Rg1内源性神经营养因子释放的调控作用为核心，初步观察人参皂苷Rg1对氧糖剥夺／复氧(oxygen-glucose deprivation／reperfusion，OGD／R)所致神经元损伤后突触可塑性的影响，以明确人参皂苷Rg1对神经元突触可塑性的作用机理，以期为中药的内源性神经保护机制提供新的思路。 方法： 1.对治疗脑卒中的临床中成药研究文献进行数据分析。 2.原代培养大鼠皮层神经元，建立OGD／R诱导的神经元损伤模型： 2.1 采用CCK-8细胞活性检测试剂盒和乳酸脱氢酶细胞毒性检测分析试剂盒观察人参皂苷Rg1对OGD／R所致神经元损伤后细胞活力影响。 2.2 采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞上清液中生长相关蛋白-43 (GAP-43)、微管相关蛋白2(MAP-2)、Tau、IGF-1、BDNF及VEGF含量。 2.3 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GAP-43，MAP-2，Tau，IGF-1，BDNF， VEGF，Bax，Bc1-2 mRNA的表达水平。 2.4 蛋白印迹法(Western blotting)检测Bax，Bc1-2蛋白活性。 2.5 采用流式细胞仪，检测人参皂苷Rg1对神经元OGD／R损伤后凋亡水平的变化。 2.6 采用Rhod 2-AM荧光探针，检测人参皂苷Rg1对神经元OGD／R损伤后胞质内Ca2?浓度的变化。 结果： 1.对组成中成药的中药类别归属情况分析发现活血化瘀药位居第2；临床用于治疗缺血性脑卒中的78种中成药中所使用的中药共计96种，累计频次为333次，其中三七13次(3.9％)，位列第五。 2.人参皂苷Rg1在0.1 μmol·L?1～25μmol·L?1剂量范围内对神经元有保护作用，最佳剂量范围在0.1μmol·L?1～10μmol·L?1之间，本研究剂量选定为0.1μmol·L?1、1μ mol·L?1、10μmol·L?1。 3.与Control相比，OGD／R组GAP-43 mRNA和蛋白表达明显提高，MAt-2、Tau mRNA和蛋白表达明显降低(P
- 作者：
- 闫晨
- 学位授予单位：
- 天津中医药大学
- 授予学位：
- 博士
- 学位年度：
- 2015年
- 导师姓名：
- 张伯礼；康立源