四川省部分地区养鸡场沙门氏菌带菌情况的调查及分离株的药物敏感性试验
Investigation of Salmonella Infection in Several Chicken Farms in Sichuan Province and Antimicrobial Susceptibility Test of the Screened Strains

禽沙门氏菌感染可引起禽类各种各样的急性或慢性疾病.禽沙门氏菌病在我国养禽业流行广泛,各地区流行的沙门氏菌血清型并不完全相同,致病力差异明显.禽沙门氏菌可通过消化道,交配、人工授精等方式水平传播,也可垂直传播.家禽一旦感染沙门氏菌,轻则引起生长受限,重则产蛋率、受精率、孵化率下降、出孵后雏鸡大量死亡,病鸡腹泻、组织器官变性坏死、死亡数增高,给养禽业带来重大损失.由于临床抗菌素的不规范使用使沙门氏菌病得不到有效控制,且极易形成耐药性的沙门氏菌的泛滥.为了了解四川地区养鸡场沙门氏菌带菌情况,我们在2014年12月~2015年10月对四川11个地区的养鸡场采集的915个样本进行了沙门氏菌的带菌情况调查,通过细菌分离纯化,三糖铁生化试验,PCR鉴定及血清型鉴定等方法获得96株沙门氏菌,分属于4个血清群,8个血清型.采用纸片琼脂扩散法,对分离到的96株沙门氏菌进行了21种临床常见药物的药敏试验,筛选出对分离菌具有高度敏感性、便于临床使用的药物环丙沙星、氟苯尼考、多西环素;同时检出具有耐药性及多重耐药性的沙门氏菌.研究内容及取得的成果如下:一 四川省11个地区沙门氏菌的分离纯化及血清学鉴定1.采用常规方法对采集样本进行沙门氏菌分离纯化实验将临床采集的915份样本前增菌、选择性增菌后,转种至SS、HE培养基培养、纯化.2.分离菌株三糖铁试验将分离纯化后符合沙门氏菌特征的菌株,进行三糖铁试验.3.采用PCR方法检测沙门氏菌inv A基因采用Primer5软件设计的引物,扩增特异的722bp核苷酸片段,参照朱丽娜建立PCR反应体系和优化PCR扩增条件,对符合沙门氏菌三糖铁试验结果的样本进行检测,共检出inv A基因阳性菌株103株,检出率为11.26%(103/915).4.样本沙门氏菌的血清型鉴定将PCR检出的103株inv A基因阳性菌,进行沙门氏菌A-F多价抗体O血清凝集试验,96株阳性.96株沙门氏菌菌株分属于B、C、D和E 4个血清群,8个血清型,其中仙台沙门氏菌(46/96)为优势血清型,其次为布伦登卢普沙门氏菌(9/96)、马流产沙门氏菌(8/96)、巴尔多沙门氏菌(6/96)、猪霍乱沙门氏菌(5/96)、纽波特沙门氏菌(3/96)和加瓦尼沙门氏菌(3/96)以及山夫登堡沙门氏菌(2/96);未能定型的沙门氏菌有14株.通过观察,沙门氏菌血清型分布有明显的地域性,3株纽波特沙门氏菌分布于四川新津,9株布伦登卢普沙门氏菌分离自四川彭州;值得注意的是纽波特沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌的多种宿主致病性,具有公共卫生学意义.5.样本采集地的鸡沙门氏菌带菌情况2014年12月~2015年10月对四川11个地区养鸡场采集的915个样本的沙门氏菌检出率为10.49%(96/915).被检地区鸡沙门氏菌检出量分别为:邛崃10株(10/88)、乐至3株(3/19)、金堂11株(11/115)、广汉16株(16/173)、新津9株(9/78)、眉山38株(38/120)和彭州9株(9/19);简阳(0/190)、雅安(0/22)、双流(0/85)、龙泉(0/3)等地的养鸡场采集的样本中没有检出沙门氏菌;其中彭州检出率最高40.91%,其次是眉山31.67%、乐至15.79%.在被检地区养鸡场的各种年龄鸡群养殖中,育雏阶段0~30日龄沙门氏菌的带菌率最高,为28.22%(68/241);31~60日龄的幼雏和年龄大于120日龄鸡只(主要是产蛋鸡)沙门氏菌的检出率分别为4.82%(4/83)、4.29%(19/443);61~90日龄的中雏鸡(主要为商品鸡)沙门氏菌的检出率为7.35%(68/926);91~120日龄的鸡(主要为蛋鸡)沙门氏菌的检出率0%(0/80).笼养鸡的沙门氏菌的检出率4.76%(28/588)明显低于圈舍地面散养鸡的检出率20.20%(58/287).二沙门氏菌分离菌株的药敏试验结果分析采用WHO推荐的Kirby-Bauer法对分离鉴定的96株鸡沙门氏菌进行了21种临床常用药物进行药敏试验,并按照杭州微生物试剂有限公司提供的卫生部制定《抗菌药物敏感试验标准》(WS/T125-1999)进行试验结果判定.1.药物敏感性试验结果试验显示对分离菌敏感性较高的药物:?-内酰胺类的头孢菌素类:头孢曲松(CRO)91.7%(88/96)、头孢唑林(CEZ)88.5%(85/96)、头孢噻肟(CLA)67.7%(65/96);氨基糖甙类:丁胺卡那霉素(AMK)99%(95/96)、庆大霉素(GEN)89.6%(86/96)、大观霉素(SPT)75%(72/96)、新霉素(NEO)87.5%(84/96)、卡那霉素(KAN)83.3%(80/96);喹诺酮类:培氟沙星(PEF)97.9%(94/96)、氧氟沙星(OFX)91.7%(88/96)、环丙沙星(CIP)92.7%(89/96)、诺氟沙星(NOR)72.9%(70/96);四环素类:多西环素(DOX)63.5%(61/96);氯霉素类:氟苯尼考(FLO)82.3%(79/96);多粘菌素类:多粘菌素B(PMB)93.8%(90/96).试验显示对分离菌敏感性较低的药物:?-内酰胺类的青霉菌素类:阿莫西林(AMO)38.5%(37/96)、氨苄西林(AMP)25%(24/96);?-内酰胺类的头孢菌素类:头孢拉定(CRD)49%(47/96)、头孢氨苄(CFL)54.2%(52/96);氨基糖甙类:链霉素(STR)13.5%(13/96);磺胺类:复方新诺明(SXT)34.4%(33/96).2.耐药性分析对选择的21种临床常用药物,多数沙门氏菌的分离菌显示药物耐受,耐药率从1%~66.7%不等.?-内酰胺类的青霉菌素类的耐药率:阿莫西林(AMO)61.5%(60/96)、氨苄西林(AMP)66.7%(64/96);?-内酰胺类的头孢菌素类耐药率分别为:头孢拉定(CRD)31.2%(30/96)、头孢噻肟(CLA)4.2%(4/96)、头孢唑林(CEZ)9.4%(9/96)、头孢氨苄(CFL)28.1%(27/96)、头孢曲松(CRO)1%(1/96);氨基糖甙类药物的耐药率:丁胺卡那霉素(AMK)1%(1/96)、庆大霉素(GEN)10.4%(10/96)、大观霉素(SPT)11.5%(11/96)、新霉素(NEO)8.3%(8/96)、卡那霉素(KAN)8.3%(8/96)、链霉素(STR)63.5%(61/96);喹诺酮类药物的耐药率:培氟沙星(PEF)1.1%(1/96)、氧氟沙星(OFX)1%(1/96)、环丙沙星(CIP)6.2%(6/96)、诺氟沙星(NOR)8.3%(8/96);四环素类的多西环素(DOX)耐药率:33.3%(32/96);氯霉素类的氟苯尼考(FLO)耐药率:12.5%(12/96);多粘菌素类的多粘菌素B(PMB)的耐药率:6.2%6/96)以及磺胺类药复方新诺明(SXT)的耐药率:64.6%(62/96).96株沙门氏菌分离菌中有53株表现为多重耐药,多重耐药情况达到55.21%(53/96),多重耐药严重.分离菌中,耐4种药物的菌株最多,共23株;耐3种药物和6种药物的菌株,皆为11株;有1株分离菌甚至耐16种药物.