白芍总苷对柯萨奇B<,3>病毒感染大鼠原代心肌细胞的血清药理学干预
目的：探讨白芍总苷对柯萨奇B<,3>病毒(CVB<,3>)感染大鼠原代心肌细胞有无保护作用，为该药的临床应用提供理论依据。 方法：本研究分成三个部分。 第一部分是SD大鼠原代心肌细胞培养。取出生1-3dSD乳鼠15只，无菌取其心室肌用0.25％胰蛋白酶消化后制成心肌单细胞悬液，移入培养瓶进行培养。 第二部分是各组含药血清的制备。取30只6～8周龄SD大鼠，随机分为6组，每组5只，分别为TGP低剂量组(50mg/kg.d)、TGP中剂量组(100mg/kg.d)、TGP高剂量组(200mg/kg.d)、干扰素组、双黄连组(60mg/kg.d)、正常血清组。干扰素组腹腔注射干扰素5×10<''5>U 1次/d/只，正常血清组不给任何药物。余组按各组剂量灌胃，2次/d，连续3d。末次给药1h后心脏采血10ml制成六组含药血清。并采用倍比稀释法测定含药血清对心肌细胞的毒性，根据细胞病变(CPE)结果设定含药血清终浓度为20％。 第三部分是含药血清对CVB<,3>感染大鼠原代心肌细胞的干预。取长成单层乳鼠心肌细胞，分成8组：①细胞对照组②病毒对照组③TGP低剂量组④TGP中剂量组⑤TGP高剂量组⑥干扰素组⑦双黄连组⑧正常血清组。各孔单层细胞中，除细胞对照组外，余组均按0.1ml/孔量加入含100TCID<,50>CVB<,3>的维持液。同时各组加入对应含药血清0.1ml/孔，置37℃5％CO<,2>培养箱中培养，待病毒对照组CPE出现++++时，停止培养，取各组细胞上清液用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)，置光镜下观察细胞形态学变化，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测细胞存活率。 结果：(1)TGP高剂量组、干扰素组及双黄连组细胞存活率分别为(90±4)％、(85±7)％、(85±5)％。病毒对照组细胞存活率为(43±6)％，其均数比较P<0.05。而TGP低、中剂量组及正常血清组细胞存活率分别为(4.5±3)％、(48±6)％、(42±7)％，与病毒对照组相比无显著性差异(P>0.05)。 (2)干预24h后TGP高剂量组、干扰素组及双黄连组细胞上清液中LDH、CK、cTnI均明显低于病毒对照组(P<0.05)。而TGP低、中剂量组及正常血清组与病毒对照组相比无显著性差异(P>0.05)。 结论：TGP高剂量组可减轻心肌细胞病变，减少cTnI、CK、LDH的释放，对CVB<,3>感染大鼠原代心肌细胞有保护作用。
- 作者：
- 李全礼
- 学位授予单位：
- 安徽医科大学
- 专业名称：
- 儿科学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2007年
- 导师姓名：
- 都鹏飞
- 中图分类号：
- R373.9；R542.2
- 关键词：
- 白芍总苷；柯萨奇B<,3>病毒；培养心肌细胞
- Total glucosides of paeony；Big rat；Coxsackievirus B3；Cultured myocardial cell